- Fijación: importancia, principios teóricos. Empleo de soluciones fisiológicas y soluciones tamponadas. Fijadores primarios y soluciones fijadoras: propiedades. Fijación por inmersión y perfusión. Procedimientos especiales para la fijación de invertebrados. El proceso de fijación en la práctica diaria. Métodos de fijación para microscopía electrónica de barrido y transmisión.
- Inclusión: Deshidratación, impregnación, solidificación, tallado de piezas fijadas. Descalcificación y ablandamiento. Empleo de líquidos intermediarios. Técnicas de impregnación en paraplast, gelatina, celoidina y resina sintética para microscopía óptica y electrónica. Utilización del Procesador Automático de Tejidos.
- Microtomía: Micrótomos: de rotación, criostato, vibrátomo, ultramicrótomo. Obtención de cortes para microscopía óptica y electrónica. Montaje de cortes sobre portaobjetos o grillas.
- Procesamiento de material biológico para microscopía electrónica de barrido.
- Coloración: principios teóricos. Métodos generales. Coloraciones simples y combinadas. Líquidos diferenciadores. Coloraciones topográficas e histoquímicas. Contraste con acetato de uranilo y citrato de plomo para cortes ultrafinos para microscopía electrónica de transmisión.
- Técnicas histoquímicas básicas para la detección de: glucosaminoglicanos, proteínas, lípidos, ácidos nucleicos, proteoglicanos y glicoproteínas. Importancia de los controles en las técnicas histoquímicas.
- Técnicas especiales para identificación de: fibras colágenas, elásticas y reticulares. Tinción de cartílago y hueso. Demostración de calcio, hierro y pigmentos. Impregnaciones argénticas para órganos del sistema nervioso.
- Técnicas inmunohistoquímicas: Obtención de anticuerpos. Anticuerpos monoclonales y
policlonales. Método de detección de antígenos: directo e indirecto (PAP: Peroxidasa antiperoxidasa, ABC: complejo avidina- biotina conjugado a una enzima; APAAP: método de fosfatasa alcalina anti fosfatasa). Recuperación antigénica. Inmunotinción inespecífica. Controles en inmunocitoquímica. Datasheets de anticuerpos: ¿qué información brindan? Inmunohistoquímica vs inmunofluorescencia. Cuantificación mediante la utilización de software. Microscopio confocal: versatilidad. Combinación de las técnicas inmunocitoquímicas con otras técnicas: whole mount (free floating, in toto), hibridación in situ, túnel. Aplicación en estudios de apoptosis y proliferación celular.
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